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作家用荧光素酶抒发的4T1乳腺肿瘤细胞（含或不含非常的RAW264.7巨噬细胞），极化后使用流式细胞术进行轻薄，对哺乳期雌性小鼠进行导管内接种，模拟导管环境中基础与增多的巨噬细胞-肿瘤细胞相互作用。4T1孳生发光成像用于监测原发性肿瘤滋长和移动。免疫组织化学检测肿瘤增殖、缺氧、导管结构艰涩和肿瘤免疫群。通过Luminex和ELISA测定M1-（促炎）和M2关联（抗炎）细胞因子水平（BAFF、G-CSF、IFN-γ、IL-1β、IL-4、IL-6、IL-10、MCP-1、MIP-2和TNF-α），以沟通巨噬细胞接种物的激活情状。通过ELISA测定移动卵白基质金属卵白酶9（MMP-9）和血管内皮滋长因子（VEGF）以及免疫关联疾病生物象征物几丁质酶3样1（CHI3L1）和脂质千里积卵白2（LCN2）的水平，以评估卵白质水平的疾病进展。
以下是作家的举座践诺想路！
1、发光成像技艺+免疫组化分析
将4T1乳腺肿瘤细胞和RAW264.7巨噬细胞单独培养，并用用荧光素酶抒发，导管内接种4T1和/或RAW264.7细胞至BALB/c小鼠体内（分袂为4T1+RAW264.7和4T1接种组），哄骗生物发光成像技艺和免疫组化学分析进行原发肿瘤和移动进展分析，以监测抒发4T1荧光素酶的原发肿瘤的滋长。成果泄露：哺乳期BALB/c小鼠乳腺导管中的4T1细胞具有侵袭性，肿瘤细胞在3 周时弘扬为上皮-间质改造（EMT）之前的移动特征，在5周时肿瘤细胞侵扰血管。同期4T1+RAW264.7接种组的脾脏分量和大小约为4T1接种组的1.5倍。
2、多色组化+多因子分析
在1、3和5 周时，两个接种组中的肿瘤细胞增殖一样。CAIX在两个接种组的原发性肿瘤中发现CAIX抒发从1 周详5 周渐进性增多。凭据4T1+RAW264.7和4T1接种小鼠原发性肿瘤中肌上皮细胞的细胞角卵白5染色，定量分析肿瘤细胞对导管结构的艰涩。原发性肿瘤中的细胞角卵白5阳性率冉冉镌汰，与4T1肿瘤比较，4T1+RAW264.7中的细胞角卵白5阳性率在3周时显赫镌汰，标明在存在非常巨噬细胞的情况下肿瘤细胞冲突增强。不管是接种RAW264.7巨噬细胞，腋窝淋凑趣和肺部频频是移动4T1细胞的第一个受影响部位，均在5周时出现分离，通过体外生物发光成像进行筛选泄露两个部位均发生移动。
3、多因子分析
将RAW264.7巨噬细胞与4T1乳腺肿瘤细胞共同接种可介导乳腺肿瘤微环境中的M1至M2巨噬细胞极化后，M2关联（即抗炎）TGF-β1的细胞内抒发显赫增多黄色小说，4T1+RAW264.7共培养M1关联TNF-α水平显赫镌汰，M2关联BAFF、G-CSF水平显赫升高；M1关联细胞因子MCP-1的血净水平高于4T1 onl组，M2关联TGF-β1的血净水平低于4T1 onl组，标明巨噬细胞为乳腺肿瘤微环境中的攻击免疫移动剂，可热烈影响疾病进展。
4、多色免疫组化
5、多色组化+ELISA
原发肿瘤裂解物中的局部MMP-9和VEGF水平跟着肿瘤滋长从3 周运行冉冉增多：4T1+RAW264.7接种组在3和5周时的MMP-9水平显赫高于4T1接种组，而在3周时的RAW264.7接种组显赫低于4T1+RAW264.7接种组和5 周时的MMP-9水平。
论断
肿瘤细胞和乳腺导管中的巨噬细胞之间的信号传导导致
（1）严重脾肿大时导管冲突和移动增多；
（2）M1到M2巨噬细胞极化和成立接济移动的抗炎微环境；
柠檬皮 丝袜（3）增强免疫关联生物象征物CHI3L1和LCN2的系统水平，反应疾病进展和类白血病反应。
沟通
巨噬细胞被分类为M1型巨噬细胞和激活情状M2（即瓜代激活的巨噬细胞）。肿瘤细胞不错通过介导M1型和M2型来影响先天免疫效应器以成立扼制宿主抗肿瘤免疫反应并最终导致肿瘤免疫藏匿的抗炎微环境。当巨噬细胞与肿瘤结合时，通过引发成心于滋长的乳腺肿瘤的免疫反应刺激乳腺癌的进展，而巨噬细胞约略通过成立促炎症环境和呈现肿瘤抗正本淹没肿瘤细胞。RAW264.7巨噬细胞接种物具有雷同的南北极分化。与4T1共培养的RAW264.7巨噬细胞减少了M1关联细胞因子IL-12的细胞内产生，并增多了M2关联细胞因子TGF-β1的细胞内产生。
在体内情况下，移动前4T1+RAW264.7原发性肿瘤泄露促炎性/M1关联增强，抗炎性镌汰/M2关联细胞因子。
当RAW264.7接种物泄露M1表型特征时，M1/杀瘤巨噬细胞将识别非自己的肿瘤细胞并统一它们，从而导致肿瘤细胞源性发光信号的丢失。
T细胞的浸润标明，基于4T1的TNBC导管内模子引起炎症肿瘤，在4T1+RAW264.7肿瘤中，抗炎/M2巨噬细胞象征物CD163的染色减少和中性粒细胞象征物Ly6G在3周时阳性抒发增多。
瞻望改日很长一段时间内对于肿瘤的沟通仍需探索肿瘤关联巨噬细胞偏激与肿瘤细胞的相互作用黄色小说，肿瘤微环境中各因子的传递依然肿瘤发生发展沟通的重中之重。
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